在透射電鏡中,用電子束代替平行入射光束,用薄膜狀的樣品代替周期性結(jié)構(gòu)物體,就可重復(fù)以上衍射成像過程,(2)對于透射電鏡,改變中間鏡的電流,使中間鏡的物平面從一次像平面移向物鏡的后焦面,可得到衍射譜,固定的目的主要是終止組織細(xì)胞的生化過程,同時(shí)把它們的超微結(jié)構(gòu)改變控制在zui小范圍內(nèi),并保護(hù)這些結(jié)構(gòu)在后續(xù)的脫水、包埋等過程中不被破壞;常用雙固定法,用一定濃度的戊二醛對樣品預(yù)固定,漂洗后使用鋨酸對樣品進(jìn)行后固定。
2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結(jié)構(gòu)重疊,電子束不能穿透;,3切片應(yīng)耐電子束的強(qiáng)烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當(dāng)被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動(dòng)識別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標(biāo)尺、放大倍數(shù)、儀器型號等信息,還能夠?qū)D片中進(jìn)行上偽色突出對比度、選區(qū)傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現(xiàn)結(jié)果更全面,我們一般采用的雙染法進(jìn)行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細(xì)胞核、結(jié)締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結(jié)構(gòu)、脂類、糖原等,易與CO2反應(yīng)成沉淀,染色中應(yīng)采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結(jié)構(gòu)、元素和原子分散,其本質(zhì)是信號的空間分布,基本機(jī)理與比例尺地圖是一致的。